過氧化氫酶試驗用于細菌鑒定中的生化試驗之一。具有過氧化氫酶的細菌，能催化過氧化氫生成水和新生態氧，繼而形成分子氧出現氣泡；3%過氧化氫溶液：臨用時配制；挑取固體培養基上菌落一接種環，置于潔凈試管內，滴加3%過氧化氫溶液2mL，觀察結果；于半分鐘內發生氣泡者為陽性，不發生氣泡者為陰性；革蘭氏陽性球菌中，葡萄球菌和微球菌均產生過氧化氫酶，而鏈球菌屬為陰性，故此試驗常用于革蘭陽性球菌的初步分群。
過氧化氫酶試驗方法是什么？
方法1：對斜面、平板菌苔(或菌落)或濃菌液慢慢滴上幾滴3%H2O2(約0.5～1.0 ml)后，觀察在5 min之內有否冒氣，凡冒氣者為陽性。因血細胞含有過氧化氫酶，故本試驗不能在加有鮮血的培養基上進行。在作厭氧菌試驗時，在加H2O2前應將培養物暴露于空氣中30min。例如，表皮葡萄球菌為陽性，乳酸乳球菌為陰性。
方法2：先在載玻片上加1滴3%H2O2，然后用非金屬接種工具刮取斜面或平板上的培養物與其混合，再用肉眼或低倍鏡觀察其冒氣情況。
方法3：此法適用于某些只能在含血紅素的培養基上才產過氧化氫酶的乳酸菌。為抑制假過氧化氫酶的形成，應配制特殊的無菌血瓊脂基礎培養基(在基礎瓊脂培養基中加入1%葡萄糖和2.5%脫纖維蛋白血)，然后在100℃下加熱15 min，以使血液中過氧化氫酶失活，待冷卻至40～45℃后傾注平板。在這種培養基上長出的培養物可用上述1或2法測試。
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