過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)用于細(xì)菌鑒定中的生化試驗(yàn)之一。具有過(guò)氧化氫酶的細(xì)菌,能催化過(guò)氧化氫生成水和新生態(tài)氧,繼而形成分子氧出現(xiàn)氣泡;3%過(guò)氧化氫溶液:臨用時(shí)配制;挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán),置于潔凈試管內(nèi),滴加3%過(guò)氧化氫溶液2mL,觀察結(jié)果;于半分鐘內(nèi)發(fā)生氣泡者為陽(yáng)性,不發(fā)生氣泡者為陰性;革蘭氏陽(yáng)性球菌中,葡萄球菌和微球菌均產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶,而鏈球菌屬為陰性,故此試驗(yàn)常用于革蘭陽(yáng)性球菌的初步分群。
過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)方法是什么?
方法1:對(duì)斜面、平板菌苔(或菌落)或濃菌液慢慢滴上幾滴3%H2O2(約0.5~1.0 ml)后,觀察在5 min之內(nèi)有否冒氣,凡冒氣者為陽(yáng)性。因血細(xì)胞含有過(guò)氧化氫酶,故本試驗(yàn)不能在加有鮮血的培養(yǎng)基上進(jìn)行。在作厭氧菌試驗(yàn)時(shí),在加H2O2前應(yīng)將培養(yǎng)物暴露于空氣中30min。例如,表皮葡萄球菌為陽(yáng)性,乳酸乳球菌為陰性。
方法2:先在載玻片上加1滴3%H2O2,然后用非金屬接種工具刮取斜面或平板上的培養(yǎng)物與其混合,再用肉眼或低倍鏡觀察其冒氣情況。
方法3:此法適用于某些只能在含血紅素的培養(yǎng)基上才產(chǎn)過(guò)氧化氫酶的乳酸菌。為抑制假過(guò)氧化氫酶的形成,應(yīng)配制特殊的無(wú)菌血瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基(在基礎(chǔ)瓊脂培養(yǎng)基中加入1%葡萄糖和2.5%脫纖維蛋白血),然后在100℃下加熱15 min,以使血液中過(guò)氧化氫酶失活,待冷卻至40~45℃后傾注平板。在這種培養(yǎng)基上長(zhǎng)出的培養(yǎng)物可用上述1或2法測(cè)試。
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